研究背景
自年12月以来，一种与严重急性呼吸综合征冠状病*2型(SARS-CoV-2)相关的肺炎在中国武汉出现(1-3)，被世界卫生组织(WHO)命名为冠状病*疾病-(COVID-19)。疫情在3个月内迅速蔓延至全球，并于年3月11日被世卫组织定性为大流行。截至年3月12日，中国共报告确诊病例80，例，死亡3，例。同时，另有个国家或地区报告了44，例确诊病例和1，例死亡。目前，还没有针对这种新型病*经批准的特定抗病*药物，而一些药物仍在研究中，包括瑞德西韦和洛匹那韦/利托那韦(4，5)。尽管在一名来自美国的新冠肺炎患者中，瑞德西韦被报道具有潜在的抗病*作用，但该药物的随机对照试验仍在进行中，以确定其安全性和有效性(6)。此外，由于感染病*清除延迟和并发症，新冠肺炎肺损伤患者的皮质类固醇治疗仍有争议(7，8)。由于没有有效的疫苗和特定的抗病*药物，因此迫切需要寻找新冠肺炎治疗的替代策略，尤其是在重症患者中。
恢复期血浆(CP)疗法是一种经典的适应性免疫疗法，一个多世纪以来被应用于许多传染病的预防和治疗。在过去的二十年里，CP疗法成功地用于治疗SARS、MERS和年H1N1大流行，具有令人满意的疗效和安全性(9–12)。一项来自32项SARS冠状病*感染和严重流感研究的mata-分析显示，与安慰剂或无治疗相比，CP治疗后的总死亡率显著降低(比值比，0.25；95%置信区间，0.14–0.45)(13)。然而，CP疗法不能显著提高埃博拉病*疾病的存活率，这可能是由于缺乏用于分层分析的中和抗体滴定数据(14)。由于非典、中东呼吸综合征（MERS）和COVID-19(15)的病*学和临床特征有相似之处，CP治疗可能是新冠肺炎救治的一个有前景的治疗选择(16)。COVID-19恢复的中和抗体滴度高的患者可能是CP的一个有价值的供体来源。然而，在COVID-19，恢复期血液制品的潜在临床益处和风险仍然不确定。因此，医院进行了这项试点研究，以探索在10名COVID-19重症患者中进行CP治疗的可行性。
1.材料和方法
1.1病人：年1月23日至年2月19日，医院(医院；武汉市医院；和武汉医院)进行试点研究。根据世界卫生组织暂行指南(17)和中国国家卫生委员会新冠肺炎诊疗指南(5.0版)(18)，所有患者均被诊断为重度COVID-19，并通过RT-PCR反应进行确认。入选标准为条件2-4附加条件1:1)年龄≥18岁；2)呼吸窘迫，RR≥30次/分；3)静息状态下氧饱和度低于93%;4)氧分压（PaO2）/氧浓度（FiO2）≤mmHg(1mmHg=0.kPa)。排除标准如下:1)既往对血浆或成分(柠檬酸钠)过敏史；2)全身情况严重，如器官功能严重障碍，不适合CP输液的病例。根据赫尔辛基宣言，从每位患者或合法亲属处获得书面知情同意。本研究得到了中国生物技术集团有限公司伦理委员会的批准(批准号0001)。本试验的注册号为ChiCTR0046。
1.2恢复期血浆输血的捐献者：从医院招募了10名从COVID-19康复的供体患者。恢复标准如下:1)体温正常3天以上，2)呼吸道症状消失，3)新型冠状病*RT-PCR检测连续两次结果阴性(采样间隔1天)。发病后3周或出院后4天收集献血者的血液，并获得每位患者书面知情同意书。
1.3血清学试验和RT-PCR监测SARS-CoV-2和其他病原体：在中国科学院武汉病*研究所高生物安全水平(BSL-4)实验室，用SARS-CoV-2进行空斑减少中和试验，测定血浆中和活性。中和滴度被定义为与没有新型冠状病*抗体作为空白对照的孔中斑块数量相比，斑块数量减少50%的最高血清稀释度。抗体受体结合域的中和活性通过夹心ELISA检测。用ELISA法检测新型冠状病*抗体效价。用RT-PCR检测新型冠状病*核糖核酸，结果以Ct值表示。亚甲蓝残留用紫外法检测。乙型和丙型肝炎病*、艾滋病病*和梅*螺旋体的血清学筛查为阴性。
1.4治疗：所有患者都被送入ICU并接受抗病*治疗和其他支持性护理，而一些患者在适当的情况下接受抗生素治疗、抗真菌治疗、糖皮质激素和氧气支持。按照世卫组织输血方案，在4小时内向患者输入一剂中和活性大于1:的毫升灭活恢复期血浆。
1.5数据收集：从医院电子病历系统中检索所有登记患者的临床信息，包括基线人口统计数据、患病天数、表现症状、不同种类的检查和治疗方法。在入院后48小时内，通过呼吸道、泌尿道或血液培养的阳性培养物鉴定出细菌共感染。记录并发症，包括急性肾衰竭、急性冠状动脉综合征、心肌炎、急性医院感染。记录辅助机械通气、鼻内吸氧和给药方案的应用。在治疗期间监测血清样品中的新型冠状病*核糖核酸。
1.6结局的衡量和定义：主治医师每天记录临床症状。血液检测和生化检测每1~2天进行一次，新型冠状病*核糖核酸检测每2~3天进行一次，电脑断层扫描每3~5天重复一次，主要终点是输血的安全性。第二个终点是输血后3d内临床症状和实验室及放射学参数的改善。临床症状改善被定义为体温正常化、呼吸困难缓解和氧饱和度正常化，放射学改善被定义为肺部病变的不同程度吸收。
3.结果：
3.1恢复期血浆对SARS-CoV-2的中和活性：使用最近分离的病*株(1)通过经典斑块减少试验来评估恢复期血浆针对新型冠状病*的中和活性。在第一批从40名新冠肺炎病患者中回收的血浆样本中，39名显示出至少1:的高抗体滴度，而只有一名的抗体滴度为1:32。这一结果为我们在重症患者中进行恢复期血浆治疗临床试验奠定了基础。
3.2研究中患者的基本特征：从年1月23日至年2月19日，10名严重的新冠肺炎患者(6名男性和4名女性)被纳入研究并接受了恢复期血浆输血治疗。中位年龄为52.5岁(四分位区间[IQR]，45.0岁至59.5岁)(表1)。没有患者直接接触过华南海鲜批发市场。从出现症状到入院和输血的中位时间分别为6天(IQR，2.5天至8.5天)和16.5天(IQR，11.0天至19.3天)。三名患者受到聚集感染的影响。发病时最常见的症状是发烧(10例患者中有7例)、咳嗽(8例)和气短(8例)，不常见的症状包括咳痰(5例)、胸痛(2例)、腹泻(2例)、恶心和呕吐(2例)、头痛(1例)和喉咙痛(1例)。四名患者患有潜在的慢性病，包括心血管和/或脑血管疾病和原发性高血压。9名患者接受了阿比朵尔单药治疗或联合瑞莫司韦(1例未纳入当前临床试验)、利巴韦林或帕拉米韦治疗，1名患者接受了利巴韦林单药治疗(表2)。当患者合并感染时，使用抗菌或抗真菌治疗。6名患者接受了甲基强的松龙静脉注射(20mg/24h)。
CT结果显示，所有患者均表现为双侧毛玻璃样混浊和/或肺实质实变，主要在肺中分布胸膜下和支气管血管束。7例患者有多叶受累，4例患者有小叶间隔增厚。
3.3恢复期血浆输注效应:临床症状的改善：通过恢复期血浆治疗，这10名患者的所有症状，尤其是发热、咳嗽、气短和胸痛，在1到3天之内都消失了或大大改善了。CP治疗前，3例患者接受机械通气，3例接受高流量鼻插管氧合，2例接受常规低流量鼻插管氧合。经CP治疗后，2名患者停止机械通气，改用高流量鼻插管，1名患者停用高流量鼻插管。此外，在一名接受传统鼻插管充氧治疗的患者中，连续充氧转变为间歇充氧(表2)。胸部CT检查肺部病变减少。根据胸部CTs，所有患者在输注CP后均显示出不同程度的肺部病变吸收。代表性胸部CT患者9和患者10的图像显示在图1中。患者9，49岁，女性，发病后1天入院(dpoi)，显示出最明显的肺部影像改善。在入院10天后，注射一剂毫升的CP,新型冠状病*核糖核酸在第12天转变为阴性。与第7天时的结果相比，第13天时CT表现为大量浸润和毛玻璃样病变衰减消失，肺功能明显改善。患者10是一名50岁的男性，发病3天入院，并在第20天时接受了毫升的CP治疗。他的胸部CT显示入院时有大量浸润和广泛的毛玻璃样衰减，并在输完CP后5天开始显示肺部病变逐渐吸收。新型冠状病*核糖核酸在第25天变成阴性。常规实验室标准和肺功能的改进。淋巴细胞减少症是COVID19(2)中预后的一个重要指标，在CP输血后有改善的趋势(中位数:0.65×/LVS0.76×/L)，10名患者中有7名显示淋巴细胞计数增加(图2)。关于其他实验室试验，我们观察到与CP治疗前的状态相比，炎症和/或肝功能障碍的指示参数有减少的趋势。这些包括C反应蛋白(CRP)(中位数:55.98mg/LVS18.13mg/L)、丙氨酸氨基转移酶(中位数:42.00ug/LVS34.30ug/L)和天冬氨酸氨基转移酶(中位数:38.10ug/LVS30.30ug/L)(表3)。总胆红素(中位数:12.40μmol/LVS13.98μmol/L)保持不变，除了患者1有明显增加(图2)。在我们的试验中，大多数患者的血氧饱和度不断增加(中位数:93.00%VS96.00%)，这表明肺功能正在恢复。尽管提供了最大限度的支持护理和抗病*药物，但这种时间关系仍很显著。
值得注意的是，患者1，一名46岁的男性，发病8天入院，恢复得非常快，实验室检查的结果有了很大的改善。入院时，他接受了抗病*药物(阿比朵尔和利巴韦林)治疗和高流量鼻插管。机械通气在入院10天时进行，用于重症监护支持。11日时进行CP输血。12日时，新型冠状病*试验转为阴性，CRP从65.04mg/L急剧下降至23.57mg/L，SaO2从86%增加至90%(图3)。机械通气在输血后2天后停止。在15天时，观察到淋巴细胞计数的稳定升高和氨基清除水平的下降，表明免疫和肝功能的改善。
中和抗体滴度增加，新型冠状病*核糖核酸消失：除一名患者(患者2)外，我们测定了所有患者输血前后的中和抗体滴度(表4)。5例患者的中和抗体滴度升高，4例患者在输血后仍保持在相同水平。在输血前，7例患者血清中的SARS-CoV-2呈阳性，3例呈阴性。值得注意的是，CP治疗后第2天有3名患者、第3天有3名患者和第6天有1名患者的新型冠状病*核糖核酸水平降低到检测不到的水平。这些结果支持CP对新型冠状病*的中和作用。
最近的历史对照组与接受CP治疗的患者的结果对比：历医院接受治疗的队列中随机选择的10名患者组成，并根据年龄、性别和疾病严重程度与我们试验中的10名患者进行匹配。CP治疗组和对照组患者的基线特征无显著差异，而两组患者的临床结局有所不同:CP组有3例患者出院，7例患者病情明显好转，准备出院，而对照组有3例死亡，6例患者病情稳定，1例患者病情好转。
输血的副作用：病人2出现了一个短暂的面部红斑。CP输血后无严重不良反应或安全事件记录。
研究结论
这项关于恢复期血浆治疗，初步研究显示该治疗对严重新冠肺炎病患者的潜在疗效和低风险。一剂含有高浓度中和抗体的CP可以快速降低病*载量，并有助于改善临床指标。但最佳剂量和治疗时间点，以及CP治疗的明确临床益处，需要在随机临床研究中进一步研究。
参考文献
1.P.Zhouetal.,Apneumoniaoutbreakassociatedwithanewcoronavirusofprobablebatorigin.Nature,–().
2.N.Chenetal.,Epidemiologicalandclinicalcharacteristicsof99casesofnovelcoronaviruspneumoniainWuhan,China:Adescriptivestudy.Lancet,–().
3.WorldHealthOrganization,Coronavirusdisease(COVID-19)Pandemic.
